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    Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I,來源于牛胰腺 (凍干粉形式,即用型液體形式,懋康生物)
    時間:2018-04-28     作者:懋康原創     文章來源:懋康生物    

    Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I,來源于牛胰腺

    (凍干粉形式,即用型液體形式,懋康生物)

     

    關鍵詞:

    脫氧核糖核酸酶I DNase I;核糖核酸酶 RNase;全能核酸酶 Benzonase;Sigma D5025; Sigma DN25;CAS:9003-98-9;

     

    需求背景:

    分子生物學實驗中,在RNA樣品的制備過程中,常常會受到樣品中不可避免存在的DNA的干擾,為了保證RNA樣品的純度以及滿足后續RNA相關研究的順利開展,需要DNase I有針對性的酶解DNA。另外,在蛋白制品的生產中比如抗體,重組蛋白,細胞裂解這步釋放的內含物中除掉蛋白外,往往有很高含量的核酸(DNA, RNA),核酸的存在嚴重干擾制品的純化和活性,為此,利用DNase I和RNase組合方式來去除核酸干擾,也很必要。還有,在其他的實驗比如TUNEL細胞凋亡檢測中常用DNase I對細胞樣本核酸進行剪切,以得到實驗所需的陽性對照。

     

    基本介紹:

    脫氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,縮寫DNase I,在大多數細胞和組織中都能發現的一種核酸內切酶,偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵,產生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸(見下圖反應流程圖),平均消化產物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下,DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點;而在Mn2+存在條件下,DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點進行切割。DNase I可水解多種形式DNA,如單鏈DNA、雙鏈DNA,甚至染色質(其切割速率受組蛋白影響)。

    脫氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,縮寫DNase I,最早從胰腺中分離而來,至今哺乳動物胰腺也是最主要的來源之一。DNase I以兩對二硫鍵結合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8,DNase的活性依賴于Ca2+,并可被二價金屬離子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。

     

    主要應用:

    ◇   制備不含DNA的RNA樣本;

    ◇   RT-PCR反應前RNA樣本內基因組DNA等可能存在DNA污染的去除;

    ◇   T7,T3,SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄后DNA模板的去除;

    ◇   DNase I足跡法(DNase I footprinting)研究DNA-蛋白質相互作用;

    ◇   缺口平移法標記探針用;

    ◇   制備隨機DNA片段文庫;

    ◇   TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照;

     

    我司(懋康生物MKBio)提供的脫氧核糖核酸酶I(DNase I),來源于牛胰腺,通過親和色譜純化所得,不含RNase和蛋白酶污染。為了滿足工業用戶和科研用戶的不同應用需求,我們提供凍干粉(不同比活)和即用型液體形式的DNase I。具體信息如下:


    一、脫氧核糖核酸酶I(DNase I)(凍干粉形式,比活力≥2000 Kunit U/mg protein)

    1.1 產品特征:

    1)   CAS NO:9003-98-9

    2)   蛋白純度:≥80%(biuret),色譜純化

    3)   比活力:≥2000Kunit Units/mg protein

    4)   活力定義:25℃,pH5.0條件下DNase催化底物DNA,使每毫升每分鐘ΔA260增加0.001的變化定義為一個酶活力單位(Kunitz unit)。

    5)   激活劑:多種二價金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

    6)   抑制劑:β-巰基乙醇;螯合劑;SDS;肌動蛋白;并沒有特異性抑制DNase I酶活的通用抑制劑,比如檸檬酸鹽抑制Mg2+活化的DNase I,但不能影響Mn2+激活的DNase I。

    7)   溶解性:溶于0.15M NaCl(5mg/ml),無色透明溶液


    1.2 訂購信息:產品性能媲美Sigma D5025,本品生產至少十年以上,銷售到國內各大實驗室,歡迎各大工業和科研用戶前來咨詢。電話:021-54736159,QQ:2971634497。

    產品名稱

    產品編號

    規格         

    價格          

    Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein

    脫氧核糖核酸酶I,來源于牛胰腺

    MF0401-15KU   

    15KU

    380

    MF0401-50KU

    50KU

    980


    二、脫氧核糖核酸酶I(DNase I)(凍干粉形式,比活力≥500 Kunit U/mg protein)

    2.1 產品特征:

    8)   CAS NO:9003-98-9

    9)   分子量:~31 kDa

    10)同義名:DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶,脫氧核糖核酸酶A

    11)  比活力:≥500 Kunit Units/mg protein

    12)  活力定義:在50μl含40mM Tris-HCl, pH8.0,2.5 mM MgSO4,1mM CaCl2的反應緩沖體系中,37℃,10min內完全降解1μg λ-DNA所需的酶量即為一個活力單位。此反應條件下得到的一個單位DNase活力約等于一個Kuntiz unit。

    13)  激活劑:多種二價金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

    14)  抑制劑:EGTA,EDTA,鹽離子濃度(>100mM)都能降低DNase活性

    15)  熱失活:含終止溶液(20mM EGTA,pH 8.0)內65℃,處理10min

    16)  溶解性:溶于緩沖液(≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油)


    2.2 訂購信息:產品性能媲美Sigma DN25。比活低于MF0401(≥2,000 Kunit U/mg protein),價格更加經濟。歡迎咨詢,電話:021-54736159,QQ:2971634497。

    產品名稱

    產品編號

    規格 

    價格        

    Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein  

    脫氧核糖核酸酶I,來源于牛胰腺

    MF0402-10MG   

    10MG     

    250

    MF0402-50MG

    50MG

    680


    三、脫氧核糖核酸酶I(DNase I)(即用型溶液)

    3.1 產品特征:

    試劑盒形式提供,其中DNase I以即用型溶液(1U/μl) 形式提供,酶經過嚴格質控能極好的消化模板;還提供10× Reaction Buffer和10× Stop Solution,節省了試劑配制的時間,用起來更加快捷。


    3.2 試劑盒包裝:

    組分編號

    組分名稱

    貨號(規格)

    MF0405-200U      

    MF0405-1000U    

    MF0405-A    

    DNase I Solution (RNase & Protease-free)     

    200U

    1000U

    MF0405-B

    10× Reaction Buffer

    200μl

    1ml

    MF0405-C

    10× Stop Solution

    200μl

    1ml


    3.3 使用方法【以RT-PCR反應前RNA樣本內DNA污染的去除為例】

    1)DNA模板經核酸內切酶線性化,用酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于適量無菌去離子水中。

    2)往一個RNase-free EP管內依次加入下列試劑:

    RNA樣本

    1μg             

    10× Reaction Buffer

    1μl

    用DEPC-treated Water補充    

    至9μl

    DNase I (1U/μl)

    1μl

    【注意】:如果需要處理較大量的RNA樣品,可按比例放大上述反應體系。條件許可下最好往體系內加入適量RNase抑制劑(貨號:MF0218-2KU)以防止RNA降解。

    3)   37℃孵育30min。

    4) 往上述體系內加入1μl 10× Stop Solution使其終濃度為1×,混勻。之后65℃孵育10min使DNase I失活?!咀⒁狻浚阂欢ㄒ燃尤?0× Stop Solution,然后再加熱失活RNase I,否則先加熱可能引起RNA被降解。

    5)加熱處理后的RNA樣品即可直接用作RT-PCR反應用的模板。


    3.4  訂購信息:即用型試劑盒,科研單位且用量不多用戶的首選。歡迎咨詢,電話:021-54736159,QQ:2971634497。

    產品名稱

    產品編號

    規格            

    價格             

    DNase I Solution (RNase & Protease-free)          

    脫氧核糖核酸酶I溶液(無RNase &蛋白酶)

    MF0405-200U          

    200U

    198

    MF0405-1000U

    1000U

    848

     

    關產品

    貨號

    名稱

    規格          

    MF0402-10MG      

    Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein      

    10MG

    MF0401-15KU

    Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein

    15KU

    MF0405-200U

    DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脫氧核糖核酸酶I溶液

    200U

    MF0203-100MG

    Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas

    100mg

    MP1509-25KU

    Benzonase Nuclease 全能核酸酶

    25KU

    MF0201-100MG

    Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K

    100mg

    MF0218-2KU

    RNase Inhibitor (40U/μl), Murine小鼠RNA酶抑制劑

    2KU

    MF0404-500ML

    DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(無DNase、RNase ) 

    500ml

     

     — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

     

    上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。 

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