Golgi-Tracker Red (BODIPY?TR Ceramide), for live-cell imaging 

高爾基體紅色熒光探針（活細胞成像用）

懋康生物提供多款高爾基體（Golgi apparatus）熒光探針:

【1】NBD C6-Ceramide【綠色熒光，適用于活細胞和固定細胞】

【2】BODIPY?TR Ceramide【紅色熒光，適用于活細胞】

【3】BODIPY?FL Ceramide【綠色熒光，適用于活細胞，可能某些情況下也呈現紅色熒光，取決于在細胞內的定位】

Golgi-Tracker Green；BODIPY? FL C5-Ceramide；Golgi apparatus高爾基體；Golgi-Tracker Red；高爾基體染色探針；BODIPY? FL；ER-Tracker Green 內質網熒光探針；

產品信息

產品描述

Golgi-Tracker Red是神經酰胺的熒光偶聯物，即BODIPY? TR標記的Ceramide（BODIPY? TR Ceramide），選擇性結合高爾基體（Golgi apparatus），Ex/Em=589/617nm（光譜特征見Fig 1），用Texas Red光學濾片設置來觀察。Golgi-Tracker Red與同類型的NBD C6-ceramide相比較，表現出更好的抗光衰減性和更明亮的熒光，在很多應用上都能替代NBD C6-ceramide。Golgi-Tracker Red也能用于鞘脂運輸和代謝研究，測定Schwann細胞合成脂類的速率，以及標記細胞輪廓以便在共聚焦顯微鏡下觀察形態運動。

Fig1. Golgi-TrackerRed的激發和發射光譜圖。

懋康生物（MKBio）提供的Golgi-TrackerRed是與BSA結合后的復合物，不僅避免有機溶劑的引入，而且對活細胞呈現出更高效的高爾基體標記率。本品另提供稀釋液,使用更便捷。本品適用于活細胞的高爾基體熒光標記，不適用于固定細胞。若需要做固定細胞的高爾基體染色，可選擇NBD C6- ceramide（MX4354-1MG）。

產品包裝

保存與運輸方法

保存：-20oC避光干燥保存，至少6個月有效。 

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 整個染色過程中需注意避光。

2） Golgi-Tracker Red在4℃，冰浴等較低溫度下會凝固而粘附在離心管官底、管壁或管蓋內，可將置于25℃水浴溫育片刻直至全部融解后使用。對于微量液體，每次使用前低速離心使得液體全部沉降至管底，再開蓋使用。

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. Golgi-TrackerRed工作液的配制

① 第一次使用本品，可將Golgi-Tracker Red (0.5mM)根據單次用量分裝，比如10μl/管。本品一管含30μl（總量：1mg），由于本身量微少，務必低速離心后再開蓋，然后用低吸附槍頭吸取母液，并分裝-20℃凍存，避免反復凍融。

②吸取少量Golgi-Tracker Red (0.5mM)按照1：100的比例用Golgi-Tracker稀釋液來稀釋，比如：取10μl Golgi-Tracker Red (0.5mM)加入到1ml Golgi-Tracker稀釋液中，混勻后即為Golgi-TrackerRed工作液，工作液請現配現用。

【注意】：Golgi-Tracker Red的工作濃度可以根據實際情況進行適當調整，推薦的稀釋比例調整范圍為1:50~1:200。

2. 活細胞高爾基體的熒光標記

① 去除細胞培養液，用適量的溶液如Hanks平衡鹽溶液（含鈣鎂）（貨號：MS3505-500ML）或其他緩沖液來洗滌生長在蓋玻片上的細胞。

② 去除洗滌液，加入新鮮配制的Golgi-Tracker Red染色工作液，4℃孵育30min。

③ 吸走染色液，用冰浴預冷的細胞培養液洗滌細胞3次左右，換新鮮培養液37℃再孵育30min。

④ 用新鮮培養液再洗滌一次，隨后用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到高爾基體呈明亮的強熒光染色，而細胞內的其他膜系統呈比較微弱的熒光染色。

染色示例【來自文獻資源】

Ref 1）Egelund J. et al. Arabidopsis thaliana RGXT1 and RGXT2 Encode Golgi-Localized (1,3)-α-d-Xylosyltransferases Involved in the Synthesis of Pectic Rhamnogalacturonan-II. Plant Cell. 2006; 18: 2593-2607

實驗對象：擬南芥表皮細胞（Arabidopsis Epidermal Cells）

染色目的：高爾基體染色（BODIPY TR ceramide stain for Golgi apparatus）

染色結果：

Fig 1. Subcellular Location of RGXT1-EGFP Fusion Protein in Arabidopsis Epidermal Cells after Biolistic Particle Delivery Analyzed by CLSM. (F) Fluorescence from the RGXT1-EGFP fusion protein. (G) Fluorescence from the BODIPY TR ceramide. (H) Merged images of (F) and (G) showing that the RGXT1-EGFP fusion protein colocalizes with the BODIPY TR ceramide.

Ref 2）Hong, X., Schouest, B. & Xu, H. Effects of exosome on the activation of CD4+ T cells in rhesus macaques: a potential application for HIV latency reactivation. Sci Rep 7, 15611 (2017).

實驗對象：外泌體（Exosomes）

染色目的：外泌體染色（Exosome staining）

染色步驟：總的來說，1?μl TR Ceramide儲存液 (dissolved in DMSO, 1?mM) or 20?μl anti-CD63加入 3?×?108外泌體（200?μl），37℃孵育20min。通過外泌體純化柱（Exosome Spin Columns）來去除未標記的染料或抗體，轉到載玻片（108in 200?μl），干燥過夜，共聚焦成像分析。

Fig 2. Isolation and identification of plasma exosomes in rhesus macaques. PBMC (A) and exosomes (B) stained by BODIPY TR, or exosomes stained by CD63 (C). Exosomes were isolated from plasma, stained by BODIPY TR, and spun onto the slide. Note CD63 aggregation on the membrane of small exosome vesicles in heterogeneous size.

Ref 3）

實驗對象：配子母細胞

實驗目的：膜標記

實驗方法：用BODIPY-TR-ceramide染色評估配子母細胞的膜重組。寄生蟲用含0.7umol/L BODIPY-TR-ceramide的完全培養基孵育過夜。

Fig 3. P. falciparum gametocytes exhibit increased sensitivity to mitochondrial tricarboxylic acid (TCA)-cycle inhibitors. Day 7 gametocytes were labeled with (C) rhodamine-123 (Rho123) or (D) BODIPY-TR-ceramide. In untreated gametocytes, these dyes accumulated (white arrows) in (C) the reticulate mitochondrion and (D) intracellular membranes, but redistributed to the parasite plasma membrane in treated parasites (yellow arrows).

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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